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本发明提供了一种抗穿刺锂电池复合隔膜、制备方法及应用，涉及锂电池隔膜领域，包括上表层和下表层，由交联型呋喃基聚酰胺静电纺丝纳米纤维构成；芯层，由含呋喃环的多孔/中空聚酰亚胺微球和聚烯烃基膜，所述聚烯烃基膜至少一侧表面具有同源过渡层；所述微球表面保留部分酰胺酸/酸酐基团，所述表层纳米纤维与所述微球之间通过热压形成共价键合与物理互穿网络。本发明采用上述的一种抗穿刺锂电池复合隔膜、制备方法及应用，原料易得，工艺可控，可采用现有静电纺丝和涂覆设备实现规模化生产。所得复合隔膜适用于锂离子电池，尤其适用于高安全、高能量密度动力电池，具有良好的工业应用前景。