中国农业科学院兰州兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心）

本发明公开了一株A型口蹄疫病毒146S抗原特异性单域抗体及其应用。本发明以灭活的A型FMDV A/WH/09毒株146S抗原免疫骆驼，结合抗原特异性细胞分选、高通量测序和ELISA筛选，获得一株单域抗体VHH‑A25，所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或与SEQ ID NO:4具有至少95%同源性且具有相同抗原结合特异性的氨基酸序列。ELISA鉴定结果表明，VHH‑A25对A/WH/09毒株146S抗原具有明显反应，而对A/WH/09毒株12S降解产物及O型FMDV抗原反应较弱，提示其能够优先识别A/WH/09毒株完整146S颗粒。该单域抗体可用于A型FMDV A/WH/09毒株146S抗原检测、疫苗抗原质量评价及相关检测试剂盒制备，具有特异性好、易于重组表达和应用开发等优点。

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及NCAM2过表达细胞系的构建及作为塞内卡病毒生产细胞系的应用。具体为：本发明发现在SVA不易感细胞系A549中过表达NCAM2基因后，SVA结构蛋白VP2显著增加，且SVA病毒拷贝数以及病毒滴度显著增加，表明NCAM2基因显著促进了SVA的复制，NCAM2过表达细胞系可作为SVA的生产细胞系，用于SVA或其疫苗的表达增效。

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种NCAM2为靶点在筛选抑制塞内卡病毒复制药物中的应用。具体为：本发明发现敲除NCAM2基因能够抑制塞内卡病毒的复制，可作为靶点用于筛选抑制塞内卡病毒复制的药物；以NCAM2基因为靶点设计了靶向NCAM2的sgRNA，结合CRISPR‑Cas9技术在HEK‑293T细胞中实现了NCAM2的敲除；HEK‑293T细胞中NCAM2基因敲除后，SVA的复制显著受到抑制，病毒核酸和蛋白滴度明显降低，对SVA的感染机制及防控策略提供一些理论依据，具有广阔的应用前景。