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本发明公开了一种提高可得然胶产量的农杆菌(Agrobacterium sp.)基因敲除工程菌及其构建方法和应用，属于生物工程技术领域。所述工程菌菌株以土壤杆菌CGMCC No.11546为出发菌株，通过基因同源重组技术，将琥珀酰多糖合成相关基因簇(exoX、exoU、exoV、exoW、exoT、exoH、exoK、exoL、exoA、exoM、exoO、gulU‑exoN和exoP)进行敲除后所获得。本发明成功构建了一种高产可得然胶的工程菌菌株，所述菌株能够显著提高农杆菌合成可得然胶的能力。本发明为可得然胶的工业化生产提供了优良的菌株资源，为工业化液体发酵生产可得然胶增添了新的选择可能性。