一种基于引导编辑系统的基因启动子连续逐步删除的方法

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于引导编辑系统的基因启动子连续逐步删除的方法。本发明提供的基因启动子连续逐步删除的方法包括以下步骤：对ePE6d进行改构，得到ePE6d‑dual35S载体，由其中的双重复合启动子35S‑CmYLCV‑U6驱动，得到双pegRNA表达框；在植物目标基因的启动区选择至少3个NGG PAM位点和至少3个CCN PAM位点，并对NGG PAM位点和CCN PAM位点进行编辑组合；针对每个NGG PAM位点和CCN PAM位点设计sgRNA组合，得到NGG‑pegRNA和CCN‑pegRNA，在双pegRNA表达框中插入NGG‑pegRNA序列，并按照编辑组合插入CCN‑pegRNA，得到双pegRNA载体文库，最后将双pegRNA载体文库转化至植物细胞中，进行植物目标基因启动子片段的删除，得到连续逐步删除后的突变体库。本发明提供的方法可以获得不同长度的启动子截断突变体。