一种基于点击化学的转录组测序文库的构建方法及其试剂盒和应用

本发明公开了一种基于点击化学的转录组测序文库的构建方法及其试剂盒和应用，属于分子生物学技术领域。本发明通过CuAAC化学连接实现RNA 3'端精确锚定，同时利用逆转录酶活性与模板转换寡核苷酸实现RNA 5'端定向捕获，实现双端锚定的同时又具有链特异性。进一步通过筛选特定的三唑连接结构、多腺苷酸聚合酶、逆转录酶，优化加成反应和逆转录反应的反应体系，使获得的测序方法极大地提升了测序资源的利用效率，并增强了目标信号的富集纯度。利用本发明的测序方法能够提高转录本检测灵敏度、覆盖更广泛的RNA类群，并获得更完整的转录本末端序列信息。因此，本发明的测序方法具有良好的应用前景。