基于等温扩增与CRISPR/Cas12信号放大的汉滩病毒检测系统及检测方法

本发明公开了一种基于等温扩增与CRISPR/Cas12信号放大的汉滩病毒检测系统及方法，属于病原微生物和耐药基因检测技术领域。通过设计多组靶向汉滩病毒基因组不同保守区域的起始引物与扩增引物，形成多靶点并行扩增；利用BstNI内切酶切割起始引物3'端磷酸化序列以激活延伸，结合Nt.BstNBI与Bst DNA聚合酶大片段实现级联等温扩增；利用Cas12蛋白与crRNA识别扩增产物中的激活序列，触发荧光报告探针的信号输出。该检测方法无需热循环仪，检测限可达10 copies/μL，对病毒变异和RNA降解具有高容错性，并可选配一体化样本处理模块适用于野外现场快速检测。