综合区域医疗中心蚌埠医院（蚌埠医科大学第二附属医院）

本发明公开了一种基于qPCR技术的细胞制剂微生物污染快速检测方法，属于基因工程技术领域，包括获取待检活细胞制剂样品，通过微过滤与超声涡旋富集去除宿主大细胞，获取痕量微生物洗脱液，经一步法恒温热裂解快速制备粗提核酸模板，将其接入包含靶向引物的qPCR体系运行扩增，依据循环数与特异性熔解峰构成的双重判定矩阵分析曲线，对信号进行定性与半定量判定，确定活细胞制剂是否存在微生物污染，本发明通过微滤超声富集与一步法热裂解实现痕量微生物的无损浓缩，克服了活细胞复杂基质的扩增抑制与宿主DNA假阳性干扰，依托双重判定矩阵实现微量污染的精准定性，提供了一种耗时短、抗干扰强、结果可靠的无菌快检方案。