安徽科兔生物技术有限公司

本发明公开了一种低DMSO含量的细胞低温冻存液及配套复苏方法，属于生物样本保存与细胞工程技术领域。该冻存液包含体积分数2%‑5%的二甲基亚砜、50‑150mM海藻糖、10‑30mM甘氨酸、0.2‑1mM N‑乙酰半胱氨酸及余量等渗缓冲液。配套复苏方法为：细胞重悬于冻存液中，以0.5‑1℃/min降温至‑80℃后转液氮保存；复苏时37℃水浴快速解冻，以含海藻糖和牛血清白蛋白的复苏缓冲液进行梯度缓释稀释后离心收集。本发明通过低浓度DMSO联合海藻糖、甘氨酸和NAC的多组分协同保护，显著降低DMSO毒性和氧化应激损伤，配合梯度缓释稀释避免渗透压冲击，复苏后细胞存活率达87%‑90%，较传统10% DMSO方案提升15%‑25%，适用于贴壁细胞、悬浮细胞、免疫细胞和干细胞等多种类型。

本发明公开了一种减少透射电镜生物样品制备收缩和变形的方法，属于透射电子显微镜生物样品制备技术领域。该方法依次包括分段式固定、缓冲液清洗、预锇化处理、二次锇化处理、水洗、两步醋酸铀染色、梯度脱水、梯度树脂渗透及包埋聚合步骤；采用常温初固定结合低温长时固定的两段固定工艺，搭配氰化钾辅助的双重锇化处理、低温避光结合高温水浴的两步醋酸铀染色，以及精细化梯度脱水与树脂渗透工艺。本发明可有效降低制样过程中样品的收缩与变形，完整保留生物样品超微结构，提升TEM成像的真实性与准确性，适用于多种生物样品，工艺重复性好。