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本申请涉及一种cfDNA中低频突变的检测方法及其应用，通过TARGET定向富集技术，建立一种高灵敏度、高特异性的突变检测方法，解决传统NGS在超低频突变检测中的假阴性率高、定量不精准等问题，这一技术突破不仅为肺癌的早期筛查和耐药监测提供了新工具，也为其他肿瘤的液态活检应用奠定了方法学基础。

本申请公开了用于检测新布尼亚病毒基因组的引物组、试剂盒及其应用。该引物组包括引物组一，其包括如SEQ ID NO.1‑39所示的核苷酸序列；及引物组二，其包括如SEQ ID NO.40‑77所示的核苷酸序列。该引物组可用于扩增新布尼亚病毒各种毒株的全基因组。本申请还先利用高效且稳定的核酸提取技术获取样本中的新布尼亚病毒的核酸，接着通过优化的逆转录体系合成cDNA，随后采用叠瓦式扩增原理设计两个多重PCR引物池，利用高保真酶对cDNA进行全基因组分段式扩增，结合三代测序平台完成新布尼亚病毒基因组的检测。该方法能够通过序列比对精准分析核苷酸突变，具有操作简便、高效快速、特异性强、准确性高的特点，为新布尼亚病毒的监测、防控及研究提供了有力工具。