常州南京大学高新技术研究院

本发明公开了一种基于双阈值群体感应时序控制的双串联Protein A B结构域自诱导可溶表达系统及方法。LuxI产生的3‑氧代己酰高丝氨酸内酯随培养进程累积，低阈值启动子P_QS37先驱动luxI‑groES‑groEL表达盒，高阈值启动子P_QS13后驱动经弱化的核糖体结合位点控制的T7 RNA聚合酶，后者再由T7或T7lac启动子驱动目标蛋白的表达。目标蛋白为两个Protein A天然B结构域通过(GGGGS)2连接肽串联形成的2×B。该构型避免BL21中既有染色体T7 RNA聚合酶造成的提前表达，并通过限制T7 RNA聚合酶翻译强度，降低本底转录与表达。所述系统以大肠杆菌的培养时间/菌体密度作为自诱导条件，有利于减轻强表达造成的宿主负担，并提高目标蛋白的功能性可溶形式的表达水平。