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本发明公开了一种NK细胞杀伤效率的检测方法及试剂盒，检测方法包括以下步骤：S1、准备靶细胞悬液和NK细胞悬液；S2、设置实验分组，包括标准曲线组、实验组和空白组；将细胞分别接种至2块96孔板上，每组均设置三个复孔，并按照实验分组进行接种；S3、在一块96孔板的实验孔上分别加入CCK‑8试剂，通过酶标仪测定各孔450 nm处的吸光度；S4、将另一块96孔板置于培养箱内继续共培养一定时间后，分别向各实验孔内加入CCK‑8试剂并通过酶标仪测定各孔450 nm处的吸光度；S5、对标准曲线组OD值与细胞数进行回归分析，若R≥0.9，则按公式计算杀伤率。本申请提供了一种NK细胞杀伤效率的检测方法及试剂盒，通过应用CCK‑8检测NK细胞对K562及A549的杀伤活性，建立CCK‑8法检测NK细胞杀伤肿瘤细胞的检测方法，操作上更加简便、耗时短、重复性好、对细胞损伤小且结果准确。