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本发明涉及脂肪酶技术领域，公开了一种耐表活和金属离子的脂肪酶及其制备方法和应用。本发明中，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的脂肪酶具有较好的耐碱性和耐表面活性剂能力，可较好地适配于油污清洁剂体系，同时还具有较好的耐金属离子能力，酶活受洗涤用水中金属离子的负面影响较小，且催化温度适配于油污清洁过程，因而在用于油污清洁剂中时，有利于实现油污（包括聚合态重油污）的高效去除；在此基础上，本发明通过对上述脂肪酶进行特定的化学修饰，能够进一步提高脂肪酶的耐碱和耐表面活性剂能力，进而提供油污清洁剂的去污性能和长期储存稳定性，同时还能提高其除菌能力，并降低其对厨房常见材质的腐蚀性。