一种谷氨酰胺合成酶完全缺失的CHO细胞株及其制备方法与应用

本发明属于生物合成领域，具体涉及一种谷氨酰胺合成酶（Glul）基因功能完全失活的CHO K1（ECACC）细胞株及其制备方法与应用。本发明采用碱基编辑器CBE4max‑SpRY靶向Glul基因编码区，在不引入DNA双链断裂（DSB）的情况下，通过向导RNA（gRNA）引导的胞嘧啶碱基定向转换（C·G→T·A），将特定密码子高效、精准地突变为终止密码子（TAG/TAA/TGA），实现Glul基因的完全敲除。所得细胞株稳转表达外源蛋白的产量显著高于商品化CHOZN及ECACC CHO K1细胞系，其中靶向6号外显子的GS06‑10克隆表达量较ECACC CHO K1野生型提高了3倍。