一种基于蔗糖水解酶的毕赤酵母无抗生素筛选系统及其应用

本发明公开了一种基于蔗糖水解酶的毕赤酵母无抗生素筛选系统及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用来源于黄曲霉的蔗糖水解酶作为毕赤酵母的新型双功能筛选标记物，既能彻底替代传统的抗生素选择标记，又能赋予重组毕赤酵母菌株直接高效利用廉价蔗糖的能力。进一步优化获得了蔗糖水解转化速率相比野生型大幅提高57%的高性能三突变体（T65A/R322Q/S323G）。同时，结合“蔗糖利用组氨酸营养缺陷”双标记系统原位共整合表达了涉及转录、折叠及转运的酵母内源辅助伴侣蛋白，成功实现了人源乳铁蛋白与人源骨桥蛋白的高效分泌表达，全流程未添加抗生素。