过表达PD-L1/TNFR1的细胞外囊泡、构建方法及其在类风湿关节炎中的应用

本申请提供了过表达PD‑L1/TNFR1的细胞外囊泡、构建方法及其在类风湿关节炎中的应用，本申请中通过构建PD‑L1/TNFR1的慢病毒表达载体，将构建的慢病毒表达载体转染入包装细胞HEK293T，以产生高表达PD‑L1/TNFR1的慢病毒，接着利用此病毒感染HEK293T细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定表达PD‑L1/TNFR1的细胞系；应用超速离心法提取稳定表达PD‑L1/TNFR1细胞分泌的高表达PD‑L1/TNFR1的EVs，并通过NTA、TEM、FCM、WB和IF证实成功构建了双表达PD‑L1/TNFR1的EVs。PD‑L1/TNFR1 EVs可以有效的聚集至RA关节病灶部位，由于PD‑L1和TNFR1共表达在EVs表面，PD‑L1和TNFR1可以同时高效的被递送至关节炎症部位。首先EVs表面上的TNFR1可以有效清除病灶处的炎症因子TNF‑α，其次EVs表面上的PD‑L1可以和RA微环境中活化的T细胞发生相互作用，抑制T细胞活性，最终达到协同改善RA的目的。