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本发明公开了一种促进颅神经嵴细胞向角膜内皮细胞分化的方法，所述方法利用化学成分明确的培养基诱导神经嵴细胞向角膜内皮细胞的分化。本发明提供的方法具有诱导分化效率高、稳定性强、培养体系成分明确、安全性高等优点，适用于规模化角膜内皮细胞的诱导分化培养；且制备的角膜内皮细胞在接触抑制、离子转运及代谢功能等方面与原代角膜内皮细胞高度一致，具有巨大的市场价值及广阔的应用前景。