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本发明公开了一种抗Oropouche病毒Gc蛋白的单克隆纳米抗体及其应用，涉及针对Oropouche病毒的抗体研究技术领域。本发明提供的抗Oropouche病毒Gc蛋白的单克隆纳米抗体，为单克隆纳米抗体OROV‑Gc‑1133、OROV‑Gc‑1136或OROV‑Gc‑1137；OROV‑Gc‑1133的重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2‑4所示；OROV‑Gc‑1136的重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6‑8所示；OROV‑Gc‑1137的重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.10‑12所示。本发明提供的特异性识别Oropouche病毒Gc蛋白的单克隆纳米抗体能够用于检测组织或者细胞上的Oropouche病毒，还可以评估各类抗Oropouche病毒的药物的治疗效果。