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本发明公开了一种抗人PRAME蛋白的抗原结合片段、单克隆抗体及其制备和应用。所述抗人PRAME蛋白的抗原结合片段的重链可变区的CDR1包括SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3包括SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；所述抗人PRAME蛋白的抗原结合片段的轻链可变区的CDR1包括SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，CDR2包括SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，CDR3包括SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。本发明的单克隆抗体具有高特异性和低交叉反应性，能够高效、特异地识别天然及变性的PRAME蛋白，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

本发明公开了一种多聚酶标记鼠兔通用型二抗及其制备方法和应用。所述多聚酶标记鼠兔通用型二抗包含抗鼠IgG和兔IgG的重组抗体，抗鼠IgG和兔IgG的重组抗体自氨基端至羧基端依次为抗鼠IgG纳米抗体、连接肽、抗兔IgG纳米抗体、人IgG铰链区肽段、多聚赖氨酸肽段和纯化标签。通过本发明中设计全新结构的抗鼠IgG和兔IgG的重组抗体，获得羧基端具有多个伯胺基团的重组抗体，可进一步利用伯胺基团偶联标记酶，开发多聚酶标记鼠兔通用型二抗的制备方法，获得多聚酶标记鼠兔通用型二抗，能够增加二抗信号放大效果、缩短二抗制备周期、简化二抗制备流程、提高批次之间稳定性，同时减少对实验动物的依赖。