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本发明公开了一种细胞来源外泌体亚群的制备方法及产品和应用，属于生物医药技术领域。该制备方法包括：细胞培养液过滤，得细胞培养上清液；用300‑500kDa中空纤维过滤器的切向流系统，浓缩5‑30倍，洗滤10‑20倍，得到浓缩液；经Sephacryl S‑400 HR凝胶过滤柱层析，收集两个280nm紫外吸收峰洗脱液，获外泌体亚群S1和S2；所述的浓缩液的上样蛋白浓度为20‑50mg/mL。本发明首次实现外泌体功能性亚群精准分离，S1亚群免疫调节活性强，S2亚群促细胞再生效果优，且工艺普适性高、可规模化生产。该亚群可用于制备免疫调节或促进细胞再生药物，为相关疾病治疗提供精准技术方案。