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本发明涉及分子生物学领域，公开了一种用于等温扩增的核酸释放剂及其使用方法，该用于等温扩增的核酸释放剂的制备方法，包括以下步骤：步骤一：通过无RNA酶水依次制备聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物稀释液、消泡剂SE‑15稀释液、乙基苯基聚乙二醇NP‑40稀释液、聚乙烯磺酸钠稀释液和Proclin300稀释液；步骤二：通过无RNA酶水依次制备乙二胺四乙酸二钠盐母液、十二烷基磺酸钠母液和甘氨酸母液。通过聚乙烯磺酸钠可特异性结合样本中的蛋白质类扩增抑制物，对拭子样本中黏膜黏蛋白、血红蛋白、多糖等抑制物进行清除，乙二胺四乙酸二钠盐可螯合金属离子以减少核酸酶对靶标核酸的影响。