원래 이름 기록: 华东合成生物学产业技术研究院; 杭州裕元生物科技有限公司; 浙江工业大学

本发明公开了一种生产肝素原的基因工程菌及其构建方法和应用，所述基因工程菌以大肠杆菌1917为底盘菌，其构建方法包括：（1）敲除底盘菌基因组中核酸内切酶Ⅰ编码基因；（2）敲除底盘菌基因组中6‑磷酸果糖激酶Ⅰ编码基因；（3）过表达来源于底盘菌基因组中的6‑磷酸葡萄糖胺合成酶编码基因和/或UDP‑葡萄糖‑6‑脱氢酶编码基因；（4）解除6‑磷酸氨基葡萄糖对GlmS的反馈抑制，以促进UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的合成；（5）敲除底盘菌基因组中6‑磷酸氨基葡萄糖脱氨酶编码基因。本发明获得的工程菌株能够更高效地合成肝素原，摇瓶效价达到397.9 mg/L，相较于野生型菌株提高了约3倍，具有一定工业应用价值。

本发明涉及肝素前体多糖技术领域，公开了一种肝素前体多糖高效胞外分泌的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明利用CRISPR‑Cas9介导的基因编辑技术增加‑表达框在大肠杆菌基因组中的拷贝数，强化了肝素前体多糖前体的合成；后过表达两种糖基转移酶基因基因、基因，加速肝素前体多糖链的合成及延长；并筛选得到能够同步强化肝素前体多糖转运系统的基因、基因、基因，筛选得到的基因、基因、基因基因能够协同作用减少肝素前体多糖前体胞内积累，从而形成“供体合成‑链延伸‑跨膜转运”三级代谢网络。最终，构建了一株能够促进肝素前体多糖胞外分泌从而高效合成肝素前体多糖的EcN基因工程菌株。