원래 이름 기록: 中国热带农业科学院橡胶研究所; 中国热带农业科学院三亚研究院

本发明涉及植物遗传转化技术领域，公开了一种PEG介导的橡胶树叶片原生质体大质粒瞬时转化方法，包括以下步骤：S1、取橡胶树2龄内古铜期后期至变色期叶片1‑2克，放入0.6M甘露醇中浸泡10min，用手术刀除去主叶脉后，将其切成0.5~1mm宽的细长条，转入30ml酶液中，放于28℃暗培养室、60r/min摇床上酶解处理5h。通过优化包括离心转速、PEG作用时间及培养条件在内的转化步骤，并采用特定配方的转化试剂，突破了橡胶树原生质体瞬时转化技术中难以逾越的质粒大小限制，实现了将15kb以上的大质粒高效导入细胞，最终达到了超过15%的基因编辑效率。

本发明公开了一种超声波辅助农杆菌介导橡胶叶片瞬时转化的方法，通过先用超声波处理橡胶幼苗，再进行农杆菌侵染的方法，避免了在利用注射器进行转化时对叶片造成严重机械损伤的情况；将橡胶叶片完全侵入侵染渗透液中保证了活体叶片瞬时转化的均匀和稳定，有效地提高了橡胶瞬时转化时的稳定性和效率，能够显著提高转化效率，缩短转化周期，为橡胶基因功能及育种研究提供了更为高效可靠且稳定的技术支持，具有广泛的应用前景。超声波辅助农杆菌介导橡胶叶片瞬时转化具有明显的优势，周期短，可以快速的验证基因的功能，防止稳定转化的盲目性，降低了稳定转化实验的失败风险，具有操作简便、对实验设备要求低、可转化大容量质粒、转化效率高、取材容易、对受体材料损伤小、成本低等优点。