基于一管法RPA-CRISPR/Cas12a的副溶血弧菌快速检测试剂盒及检测方法

本发明涉及一种基于一管法RPA‑CRISPR/Cas12a的副溶血弧菌快速检测试剂盒及检测方法。以副溶血弧菌ToxR基因为靶标，设计了特异性RPA引物和CRISPR crRNA。所建立的一管法RPA‑CRISPR/Cas12a检测体系，有效避免了开盖过程导致的气溶胶污染风险。本发明方法特异性强，与创伤弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌等近缘弧菌，以及铜绿假单胞菌、杀香鱼假单胞菌等其他水产病原菌均无交叉反应；灵敏度高，对基因组DNA的最低检测限低至1 pg/μL；检测迅速，核酸扩增与荧光检测全过程仅需约30分钟。该试剂盒及方法无需复杂仪器设备，操作简单，适合于基层对水产品样本进行现场快速检测，在副溶血弧菌的早期筛查、流行病学调查及综合防控中均具有重要应用价值。