一种构建稳定细胞池的三质粒单筛选标记物系统及其应用

本发明涉及一种基于转座技术构建稳定细胞池的三质粒单筛选标记物系统及其应用。分别将目标蛋白的第一亚基和第二亚基分别构建到两个载体上，借助IRES2序列和Npu DnaE内含肽与Puro的N端肽和C端肽连接。所用质粒大小不超过7.5 kb，构建难度系数小，可同时合成，最多需要1周时间。筛选原理是嘌呤霉素在内含肽的辅助下分成两半分别与第一亚基和第二亚基相连，当第一亚基和第二亚基基因均整合到宿主细胞的基因组中时，才能形成完整且具有功能的嘌呤霉素。因此在细胞池筛选过程中只需一种抗生素就能将阳性细胞挑选出来。本发明开发的基于三质粒单筛选标记物系统的方法在4周内即可获得稳定细胞池，显著缩减了细胞池的开发时间。