一种基于唯一分子标记符和文库扩增定量控制的环状RNA全长测序方法

本发明涉及生物技术领域，具体提供一种环状RNA（circRNA）全长测序方法。该方法包括：对RNA样本进行rRNA去除、poly(A)加尾及RNase R处理以富集circRNA；通过带唯一分子标记符（UMI）的特定引物进行逆转录和双链cDNA合成；在实时荧光定量PCR指导下确定最佳扩增循环数以构建文库；经三代测序（TGS）平台进行长读长测序；结合UMI聚类与循环一致性序列生成，采用ucRG算法实现circRNA全长结构识别和定量分析。本发明能够降低扩增偏倚和测序误差，提高circRNA识别的准确性和特异性，显著改善TGS与二代测序（NGS）平台在circRNA检测结果上的一致性，具有较高的灵敏度和定量可靠性，可广泛应用于环状RNA的基础研究和临床检测。