一种丧失外切酶活性的phi29 DNA聚合酶突变体及其制备方法和应用

本发明属于生物技术领域，涉及一种丧失外切酶活性的phi29DNA聚合酶突变体及其制备方法和应用。本发明通过phi29DNA聚合酶氨基酸序列中第54、55、90、96、102、140、163、203、212、277、284、327、439、502、505、534、552中至少一位的氨基酸残基进行修饰，生成了具有较低外切酶活性但保持聚合酶活性的新型蛋白，成功解决了phi29DNA聚合酶在实际应用中可能因外切酶活性过高导致的问题，提升了其在DNA扩增、测序以及其他分子生物学实验中的稳定性和可靠性。