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기록
一种提高三七细胞中人参皂苷Rg1含量的方法
발명유효
6청구항 · 1 독립항
§ Ⅰ
개요
발명자
张旭东; 何雪; 李唯奇; 刘梅英; 陈佳奇; 凌静; 李涵; 王沐兰; 鲁元学; 杨绍文; 李绍龙; 杨绍海
IPC 분류
C12N 15/84 (2006.01)C12P 33/20 (2006.01)
本发明涉及一种提高三七细胞中人参皂苷Rg1含量的方法,属于生物技术领域,本发明包括以下步骤:(a)构建CRISPR/Cas9表达载体;(b)采用农杆菌介导的遗传转化方法,将表达载体导入三七细胞,进行侵染和共培养;(c)对经过共培养的三七细胞进行除菌及选择培养,筛选出成功导入表达载体并具有特定抗性的三七阳性细胞;(d)对筛选出的三七阳性细胞进行分子学鉴定;(e)测定其人参皂苷Rg1的含量。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,靶向敲除三七细胞中竞争性抑制人参皂苷Rg1合成的关键酶CAS,并通过农杆菌介导的遗传转化方法将其导入三七细胞,从而筛选获得高人参皂苷Rg1含量的三七细胞系,实现三七细胞人参皂苷Rg1含量的显著提升。