一种高效稳定的基因敲除细胞系的制备方法

本发明涉及基因工程技术技术领域，具体涉及一种高效稳定的基因敲除细胞系的制备方法。本发明提供的AKAP11基因敲除细胞系，该细胞系中AKAP11基因第6外显子发生3395bp的移码缺失突变，导致编码框移位且蛋白翻译提前终止；经连续代传代培养后，通过PCR测序验证，仍保持纯合敲除表型。采用CRISPR/Cas9系统结合嘌呤霉素筛选，阳性克隆率达30％以上，构建周期缩短至45天，构建的细胞系可直接用于AKAP11相关的细胞信号通路研究、疾病模型构建及靶向药物筛选，为基础研究和临床转化提供可靠工具。