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기록
CRISPR-dCas9系统、含有该CRISPR-dCas9系统的重组菌株和应用、基因编辑的方法
발명유효
10청구항 · 4 독립항
§ Ⅰ
개요
발명자
施天穹; 姚吉宝; 李雅文; 陆蕙芝; 郭琪; 聂志奎
IPC 분류
C12N 15/113 (2010.01)C12N 9/22 (2006.01)C12N 9/78 (2006.01)C12N 15/80 (2006.01)C12N 1/15 (2006.01)C12N 15/10 (2006.01)C12R 1/645 (2006.01)
本发明涉及基因工程领域,公开了一种CRISPR‑dCas9系统、含有该CRISPR‑dCas9系统的重组菌株和应用、基因编辑的方法,所述CRISPR‑dCas9系统沿从上游向下游的方向包含5SrRNA、sgRNA、腺嘌呤脱氨突变体酶的编码基因、Linker序列I和dCas9蛋白的编码基因;其中,所述腺嘌呤脱氨突变体酶编码基因的3'端通过Linker序列I与dCas9蛋白编码基因的5'端连接,所述sgRNA和5SrRNA分别为藤仓赤霉菌的内源性引导序列和内源性启动子;所述腺嘌呤脱氨突变体酶是在腺嘌呤脱氨酶的基础上突变获得的,突变位点为腺嘌呤脱氨酶的T111R和D119N;所述Linker序列I的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 39和SEQ ID NO. 40中任意一种所示。本发明提供的CRISPR‑dCas9系统适用于藤仓赤霉菌,为藤仓赤霉菌基因功能研究及遗传改造提供高效工具,具有较高的工业潜能。