Kcnk4基因A245P点突变小鼠模型的构建方法及其应用

本发明属于基因工程领域，具体涉及Kcnk4基因A245P点突变小鼠模型的构建方法，设计了Kcnk4基因A245P点突变小鼠模型的构建方法。通过系统性优化gRNA设计算法提高切割特异性，开发高效oligo donor DNA合成策略提升重组效率，并建立多层级基因型鉴定体系确保突变准确性。具体步骤包括：设计靶向Kcnk4基因exon6的gRNA，合成含A245P突变的oligo donor DNA，显微注射至Balb/c小鼠受精卵后移植，通过PCR扩增及测序峰图分析筛选阳性F0代小鼠，与野生型交配获得稳定遗传的F1代杂合子。本发明突变效率达90%以上，基因型鉴定方法简化，测序峰图即可区分杂合子与纯合子，避免传统酶切法假阳性。该模型为神经系统疾病研究及药物筛选提供可靠工具。