基于SpyCatcher-CBM3-Tn5-His的鉴定转录因子结合DNA序列的方法

本发明公开了基于SpyCatcher‑CBM3‑Tn5‑His的鉴定转录因子结合DNA序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建SpyCatcher‑CBM3‑Tn5‑His融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；（2）构建KmRgt1‑2×SpyTag表达菌株，其中，KmRgt1‑2×SpyTag核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；（3）将SpyCatcher‑CBM3‑Tn5‑His融合蛋白与包含马赛克序列的接头序列孵育得到SCT全酶；(4)将SCT全酶固定在无定形纤维素RAC上，和含有KmRgt1‑2×SpyTag的细胞裂解液孵育；（5）Tn5切割蛋白结合的DNA片段后构建测序文库。该方法无需依赖抗原抗体反应，规避了甲醛交联对表位的影响，适用于真菌、植物等有细胞壁的生物，具有高分辨率、低背景、低成本的特点，可应用于转录因子调控网络研究。