用于假病毒标准品赋值的靶标核酸拷贝数定量方法

本发明属于假病毒评价的技术领域，具体涉及用于假病毒标准品赋值的靶标核酸拷贝数定量方法。该方法包括假病毒标准品的构建、核酸提取与扩增引物设计、错配荧光探针的构建、数字PCR反应体系的搭建及微滴划分、终点荧光信号检测与拷贝数计算、标准品校准等步骤。其中，所述探针在识别位点引入单碱基错配结构，用以增强靶标辨识特异性；数字PCR体系通过微滴生成平台形成不低于20,000个独立反应单元，实现泊松分布下的单分子定量；最终通过线性化质粒标准品建立外源校准模型，完成假病毒核酸拷贝数的高精度赋值。本发明方法具有识别特异性高、定量重复性好、适配性强等优点，适用于核酸类质控物或参考标准品的赋值建立。