一种基于CRISPR-Cas12a/Nt.BstNBI的双酶级联信号抑制的生物传感器检测方法

本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a/Nt.BstNBI的双酶级联信号抑制的微生物检测体系。该方法将Nt.BstNBI切刻酶的精准识别与切割功能与Cas12a的反式切割机制相结合，并通过动态循环设计显著提升了低浓度靶标的检出能力，从而实现了病原微生物的高灵敏检测。实际应用的场景包括海洋牧场中快速检测水样中的病原微生物，如弧菌、弧菌属细菌等，能够在短时间内提供高灵敏度的检测结果，有助于及时发现和控制海洋牧场中的病原污染。本方法中采用的双酶协同策略避免了PCR扩增步骤，减少了操作复杂性和潜在误差，避免引入非特异性产物或引发交叉污染，同时显著提高了低浓度靶标的检测能力，从而为病原微生物安全检测提供了一种更加高效和可靠的方案。