中国农业科学院农业基因组研究所

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于鉴定斑点福寿螺的特定性DNA片段、鉴定试剂和鉴定方法。本发明提出得到一段如SEQ ID NO:1所示的基因组DNA片段，为目标物种斑点福寿螺独有，特异性高，降低了检测的假阳性率，显著提高了检出率和准确率。本发明提出一种用于鉴定斑点福寿螺的试剂和方法，基于上述特异性基因组DNA片段设计，采用酶介导双重指数扩增技术，具有操作简单、检测速度快、对设备要求低等优点。

本发明公开一种高效电转染缓冲液及其制备与应用，属于真核细胞基因导入领域。针对C2C12小鼠成肌细胞现有电转染效率低、细胞死亡率高、分化潜能受损及试剂昂贵等问题，本发明提供专用缓冲液，配方含220 mM蔗糖、30 mM甘露醇、20 mM海藻糖、10 mM HEPES、1.2 mM MgCl，并添加10 μM白藜芦醇和0.005% Pluronic F‑68，pH 7.4。制备时分别配制基础母液及添加物母液，混合后调pH。使用时采用质粒或siRNA与细胞按特定比例混合电转，电转后立即用预温培养基复苏。本发明缓冲液使GFP阳性转染率达62.8%，同时维持较高细胞存活率（OD=0.46，24h），且不影响C2C12细胞后续成肌分化能力，成本不足商品化产品的千分之一，适用于高通量基因过表达和敲低实验。

本发明提供一种待测样本中N‑酰基高丝氨酸内酯的检测方法、组合物和试剂盒，涉及生物传感与分子诊断技术领域。本发明提供的方法基于核酸适配体、T4 DNA聚合酶延伸阻断、T7 RNA聚合酶原位转录与CRISPR/enAsUCas12a技术，实现了细菌群体感应信号分子N‑酰基高丝氨酸内酯的快速、高灵敏、无扩增检测，在食品安全、环境微生物监测、临床耐药菌感染诊断及群体感应抑制剂（QSI）高通量筛选等领域具有重要应用价值。

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a的草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶抗性快速检测方法。本发明针对基因的F290V突变设计特异性RPA引物和crRNA，结合CRISPR/Cas12a体系，对抗性草地贪夜蛾实现快速视觉检测。本发明提供的检测方法可在1小时内特异性区分纯合抗性品系、杂合抗性品系和敏感品系草地贪夜蛾；且该检测方法的检测灵敏度较高，最低检测浓度为0.05 ng/μL（119 copies/μL），无需高温变性设备、操作简单、特异性强，可直接应用于田间现场检测，解决了现有技术依赖实验室、耗时久、操作复杂的缺陷，为草地贪夜蛾抗性监测及科学防控提供了高效便捷的技术体系。