王叔和（武汉）生物科技工程有限公司

本发明公开了一种高纯度玻色因的合成方法和应用，属于玻色因合成技术领域；本发明的高纯度玻色因的合成方法，步骤包括：S1.将木糖、去离子水、催化剂搅拌分散，得到混合液A；S2.将乙酰丙酮溶于四氢呋喃中，然后加入混合液A，然后升温反应，冷却，过滤取滤液，用乙酸乙酯洗涤除去乙酰丙酮，收集水层，减压蒸馏，得到1‑C‑（β‑D‑吡喃木糖基）丙酮；S3.将1‑C‑（β‑D‑吡喃木糖基）丙酮和无水乙醇混合，在0~5℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠搅拌反应，得到玻色因；所述催化剂是以双氰胺为前驱体、以改性枝状纳米二氧化硅球为载体热聚合得到；改性枝状纳米二氧化硅球是将枝状纳米二氧化硅球进行氯官能化处理后与咪唑反应得到。

本发明提供了一种烟酰胺单核苷酸NMN高效合成的重组恶臭假单胞菌及构建方法及应用，以恶臭假单胞菌KT2440为底盘微生物，将来源于噬菌体的T7 RNA聚合酶通过反向筛选的方法将其整合进入恶臭假单胞菌KT2440基因组UPP基因位点，进一步运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，依次敲除烟酰胺单核苷酸(NMN)代谢途径基因PncC、PncB、UshA、NadD、NadE、MazG、NudC、NudF等，在实现T7启动子在该菌株中的正常转录表达后，采用载体表达的方法，游离过表达NMN合成途径中限速酶，分别为外源基因BaPRS、VpNadV及BMpnuC,最终该工程菌在5L发酵罐补料发酵的条件下，能够高效合成烟酰胺单核苷酸NMN，通过诱导发酵26h,烟酰胺单核苷酸NMN产量即可达到32.76g/L。