动物线粒体条形码多重PCR扩增及纳米孔测序的物种鉴定试剂盒

本发明公开了动物线粒体条形码多重PCR扩增及纳米孔测序的物种鉴定试剂盒，涉及物种鉴定技术领域。该物种鉴定试剂盒包含了针对线粒体四个高变基因（Cytb、COI、16S rRNA和12S rRNA）的优化引物对，通过在关键位点引入R、Y、D等简并碱基，显著提高了引物与不同物种模板DNA的结合能力，克服了现有通用引物在跨物种扩增时易发生错配、效率低下甚至扩增失败的难题，可用于对包含至少两种不同动物物种来源的混合DNA样本进行物种鉴定。该物种鉴定引物组合应用于制备动物物种鉴定试剂盒，扩展了试剂盒的检测覆盖范围。本发明提供的动物物种鉴定方法将多重PCR扩增体系与纳米孔长读长测序技术相结合，可区分序列高度相似的同属近缘种，具有良好的准确性。