一种基于RPA-CRISPR/Cas12a实现葡萄灰霉病菌对琥珀酸脱氢酶类杀菌剂抗药性的荧光快速检测

本发明公开了一种检测葡萄灰霉病菌对琥珀酸脱氢酶类（SDHI）杀菌剂产生抗药性的检测方法。本发明基于RPA‑CRISPR/Cas12a体系，针对杀菌剂作用靶点基因中与抗药性相关的关键突变位点设计了特异性引物对扩增目的片段和用于激活Cas12a反式切割活性的crRNA，使得抗性菌株序列匹配上crRNA才会产生肉眼可见的荧光，而敏感菌株则相反。本发明克服了传统抗药性检测方法中对实验室和大型仪器的依赖，为葡萄灰霉的精准防治和抗药性管理提供了关键技术支持，并为田间科学防控提供直接用药依据。