一种基于噬菌体展示的蛋白体内定向进化方法

本发明公开了一种基于噬菌体表面展示的蛋白定向进化方法，属于蛋白质工程与合成生物学技术领域。该方法通过构建由展示质粒pDis和诱变质粒pMut组成的双质粒系统；其中，pDis携带靶标蛋白基因与噬菌体衣壳蛋白基因，pMut携带噬菌体RNA聚合酶与碱基脱氨酶的融合蛋白基因。将二者共转化至具有琥珀抑制基因的大肠杆菌后，pMut编码的融合蛋白特异性介导pDis上的靶标基因在胞内发生转录偶联的连续随机突变；随后，借助辅助噬菌体将突变蛋白展示于噬菌体表面；通过靶标分子亲和富集阳性噬菌体，并将其直接回侵染含pMut质粒的宿主菌，即可启动下一轮突变，从而实现多轮迭代进化。本发明将体内连续突变与噬菌体展示筛选深度耦合，突破了传统体外建库的多样性瓶颈，且操作简便、进化周期短，可广泛应用于亲和蛋白、抗体片段、荧光蛋白及工业酶等多种功能蛋白的定向改造。