中国科学院天津工业生物技术研究所

本发明属于分子生物学和酶工程领域，公开一种羰基还原酶突变体及其色满酮还原中的应用。所述突变蛋白相对于野生型蛋白而言，具有显著提高的催化5,7‑二氟苯并二氢吡喃‑4‑酮中羰基还原生成R‑构型醇的活性。将其构建成活力提升的羰基还原酶突变菌株，可应用到特格拉赞中间体的生产过程中，可以实现转化260g/L底物的完全转化，生成(R)‑5,7‑二氟苯并二氢吡喃‑4‑醇。

本发明公开了一种缩合酶的突变体及由应用。本发明通过基因工程方法获得了几株活性提高的缩合酶突变体。所述突变体能高效的催化甲醛转化，尤其是大大提高了低浓度甲醛条件下，甲醛缩合产生1,3‑二羟基丙酮的效率。而产物1,3‑二羟基丙酮能够作为C6分子生物合成的关键前体，因此本发明具有较大的应用价值。

本发明公开了一种基于金属有机框架MOF共固定草酸脱羧酶OXDC与化学催化剂TEMPO的复合催化剂及其制备方法。以UiO‑66型MOF为载体，通过溶剂热合成与点击化学结合技术，实现草酸脱羧酶OXDC与化学催化剂TEMPO的级联共固定。该复合催化剂具备双功能催化特性，可连续催化乙二醇转化为乙二酸并进一步生成甲酸。实验表明，固定化酶活性最高可达3360U/g，重复使用10次后仍保持60%以上活性，在MTBE等有机溶剂中保持90%活性，对金属离子耐受性显著优于游离酶。本发明首次实现MOF载体对OXDC的高效固定，创新性构建酶‑化学催化剂协同体系，为生物传感器和工业催化领域提供了新型稳定化催化平台。

本发明属于功能小分子糖分离制备领域，涉及一种获得L‑阿拉伯糖的方法，具体涉及一种利用酶催化制备并分离纯化L‑阿拉伯糖的方法。该方法以D‑木糖为原料，经过第一步酶催化反应、第一步色谱分离、第二步酶催化反应和第二步色谱分离，并结晶，获得了高品质的L‑阿拉伯糖晶体产品，其纯度≥99％。本发明开发的分步酶催化偶联基于模拟移动床分离的L‑阿拉伯糖生产工艺具有分离纯化工艺简单、环境友好的优点；与此同时，利用模拟移动床实现了底物D‑木糖和中间产物D‑木酮糖和L‑核酮糖的循环利用，有利于降低生产成本，从而促进L‑阿拉伯糖的工业生产。

本发明公开了一种耐盐PET水解酶及其应用，属于酶工程领域。本发明以Uniprot数据库为基础，通过生物信息学手段挖掘新酶序列，得到来源于的耐盐性PET水解酶，并通过密码子优化、基因合成、细胞表达得到新酶并测定PET水解活性。本发明提供PET水解酶，相较于已报道的IsPETase，其在高盐NaCl体系中具有更好的水解活性，为海洋微塑料的降解提供了新的选择酶。

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红霉素全细胞生物传感器及其应用。所述传感器含有的MphR蛋白相对于野生型而言存在关键氨基酸残基N102和Y103的突变。本发明所得到的灵敏度更低的红霉素生物传感器突变体，可应用于高产量红霉素生产菌株的高通量筛选，从而大大提高红霉素工业菌种的筛选通量和选育速度，加快核心工业菌株迭代创新的进程。

本发明属于合成生物学与生物传感器技术领域，涉及一种砷响应全细胞生物传感器及其构建方法与应用。该传感器以大肠杆菌为宿主，包含来源于谷氨酸棒状杆菌的arsR1基因和ars操纵子的砷响应调控模块，以及由hrpR基因、hrpS基因和PhrpL启动子串联构成的级联信号放大装置；其中，所述级联信号放大装置位于所述砷响应调控模块的调控下游。传感器还包含报告输出模块，报告输出模块可以是EmGFP荧光报告模块或lacZ/X‑gal可视化显色模块前者用于荧光定量检测三价砷，后者用于肉眼判读或结合智能手机RGB通道值进行半定量分析。所述传感器对三价砷的检测限≤0.1ug/L，用于水样或食品饮料中三价砷的检测。

本发明涉及酶基因工程技术领域，特别是涉及一种基于重组酶系统的枯草芽孢杆菌基因编辑方法，在本申请中首先验证了基因重组酶系统在枯草芽孢杆菌中的活性，为枯草芽孢杆菌在合成生物学、基因治疗及其他生物技术领域的应用提供新的可能,基于重组酶系统使用抗性基因作为标记基因，扩大了roxP重组位点的选择范围，不仅可以使用roxP野生型，还可以使用多种rox突变体，实现不引入任何抗性标记基因，还能结合同源重组技术实现外源基因的精准整合，提高重组效率并减少了不必要的基因组重组，在此基础上通过Dre重组酶调控系统，减少系统的泄漏活性，使重组酶系统在枯草芽孢杆菌中的应用更加高效、可靠。

本发明公开了一种绿色合成16表雌三醇的微生物生产方法，属于发酵或使用酶的方法合成目标化合物的技术领域。本发明要解决的技术问题是：如何通过微生物发酵的方法制备获得16表雌三醇。为解决该技术问题，本发明提供一种制备16表雌三醇的方法，所述方法可包括利用含有16β‑羟睾酮的培养基培养微生物，得到含有16表雌三醇的发酵产物。本发明首次公布16表雌三醇的生物合成方法：利用含有HsCYP19A1蛋白和/或HsPOR蛋白的重组酿酒酵母将16β‑羟睾酮转化成为16表雌三醇。在16表雌三醇绿色合成领域具有重要的应用潜力和产业价值。