Original name record: 中国科学院亚热带农业生态研究所

本发明公开了一种诱导分化制备小尾寒羊脂肪细胞的方法及培养体系。该方法包括小尾寒羊脂肪组织的取材与处理、原代脂肪干细胞的分离培养、脂肪干细胞的传代纯化以及诱导分化培养等步骤。通过本发明方法能够高效、稳定地获得纯度高、功能完整的小尾寒羊脂肪细胞，诱导分化率可达85%以上，且细胞具有良好的增殖活性和脂代谢功能。本发明为小尾寒羊脂肪细胞相关的生理、病理研究以及肉羊育种、脂肪沉积调控等领域提供了重要的细胞模型，具有较高的学术价值和应用前景。

本发明涉及畜牧生物技术领域，具体公开了迷迭香酸在制备调控奶牛乳腺功能的制剂中的应用，其技术要点为：本发明方案中，迷迭香酸通过直接作用于BMECs，显著促进脂滴形成，并激活乳脂直接合成关键基因（如SCD、ACACA、FASN）的表达。实验表明，迷迭香酸以10‑100μM浓度处理BMECs 24小时，可显著抑制炎症因子（IL‑6、IL‑8、IL‑1beta、TNF‑α）的表达，降低活性氧（ROS）积累，并通过抑制脂质过氧化反应优化脂质代谢。本发明首次揭示了迷迭香酸对于BMECs兼具抗炎与乳脂合成双重调控功能，为开发天然、安全的奶牛泌乳调控剂提供了科学依据。

本发明属于生物技术领域，具体公开了非洲猪瘟病毒宿主限制性因子PML在抗病育种筛选中的应用，包括：S1、利用CRISPR/Cas9系统构建靶基因敲除的猪源细胞系；S2、用携带荧光标记的非洲猪瘟基因缺失毒株感染所述靶基因敲除的猪源细胞系及未敲除的对照组猪源细胞系；S3、比较所述靶基因敲除的猪源细胞系和未敲除的对照组猪源细胞系中病毒的增殖水平。本发明通过CRISPR/Cas9技术构建PML敲除细胞系，用携带荧光标记的ASFV毒株感染敲除细胞和野生型细胞，通过荧光强度、qPCR及WB比较病毒增殖水平，证实PML是ASFV的宿主限制性因子，为培育抗非洲猪瘟基因编辑猪种及开发ASF防控技术提供了关键靶点和理论基础。