一种高效自剪切内含肽融合蛋白表达系统构建及其应用

本发明公开了一种无需外源工具酶的自剪切内含肽（Intein）融合表达系统及其用于高效、低成本制备司美格鲁肽前体29肽（GLP‑1(9‑37)，SMG29p）的方法。本发明进一步公开了与该表达系统配套的高密度发酵工艺（基于溶氧反弹信号的联动补料策略）、pH梯度控制的洗杂与自剪切后处理工艺，以及基于反相高效液相色谱和高分辨质谱的产物确证方法。经检测，本发明制备产物与商业标准品的色谱保留时间及分子量高度吻合，自剪切转化效率不低于78.29%。本发明彻底摒弃了肠激酶、TEV蛋白酶、凝血酶等外源工具酶的使用，显著降低了生产成本、简化了纯化工艺，避免了外源蛋白残留导致的免疫原性风险，为司美格鲁肽等GLP‑1类多肽药物前体的低成本、大规模生物制造提供了一条切实可行的技术路径。